薄層色譜儀

　　簡介

　　薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù)，屬固—液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時，把吸附層加厚加大，因此，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應(yīng)及進行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。

　　薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進行化學(xué)反應(yīng)時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。

　　薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10×3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。

　　色譜法

　　薄層色譜法，是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。

　　儀器材料

　　(1) 玻板 除另有規(guī)定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光

　　滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

　　(2) 固定相或載體 最常用的有硅膠G、硅膠GF<[254]> 、硅膠H、 硅膠HF<[254]>,

　　其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F<[254]>等。

　　其顆粒大小,一般要求直徑為10～40μm。薄層涂布,一般可分無黏合劑和含黏合劑兩種;

　　前者系將固定相直接涂布于玻板上, 后者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用

　　10%～15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃加熱4小時)，混勻后加水適量使用，或用羧甲基

　　纖維素鈉水溶液(0.5%～0.7%)適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻板上。也有含一定固定相

　　或緩沖液的薄層。

　　(3) 涂布器 應(yīng)能使固定相或載體在玻板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

　　(4) 點樣器 同紙色譜法項下。

　　(5) 展開室 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴密的蓋子，

　　除另有規(guī)定外，底部應(yīng)平整光滑，應(yīng)便于觀察。

　　操作方法

　　(1) 薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,

　　去除表面的氣泡后，倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布（厚度為0.2～

　　0.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置

　　有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。

　　(2) 點樣 除另有規(guī)定外，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底

　　邊2.0cm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為

　　宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

　　(3) 展開 展開缸如需預(yù)先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，并在壁

　　上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封缸頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或

　　按正文規(guī)定操作。

　　將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5

　　～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中）,密封缸蓋,待展開至規(guī)定距離(一般為10～15cm),

　　取出薄層板，晾干，按各品種項下的規(guī)定檢測。

　　(4) 如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點作掃描

　　定量，則可用薄層掃描法。

　　薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點及使用說明，

　　結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果

　　的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下，將供試品與

　　對照品在同一塊薄層上展開后掃描，進行比較并計算定量，以減少誤差。各種供試品，

　　只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結(jié)果。

　　掃描儀

　　用表面涂有吸附劑的石英棒（直徑0、9mm；長200mm）代替薄層板，點樣于棒一端，按一般方法展開，以氫焰檢測器為檢測單元，棒放于儀器內(nèi)，點火，以一定速度掃描。

　　后測定法

　　薄層經(jīng)展開后用刮刀或捕集器將斑點的吸附劑捕集后，再用適當(dāng)有機溶劑洗脫，然后用可見、紫外分光光度法、熒光分光光度法測定含量。

　　但樣品斑點不能噴顯色劑，以免影響測定，斑點位置的確定方法。

　　樣品在紫外線下發(fā)射熒光的，可在紫外燈下觀察斑點并用針劃去斑點位置。

　　用碘蒸汽顯色，在組分處理出棕色斑點（碘吸附后會揮發(fā)）。

　　用標準物對照，將標準點于邊上一測顯色時，蓋住樣品，定出斑點位置。