一、材料的選擇實驗材料的選擇主要依據(jù)待分離制備的生物大分子物質(zhì)的含量和性質(zhì)而定。一般來說,動物或人體組織中的有效成分含量較低,如胰臟組織中胰島素的含量極低,含量小于其鮮重的百萬分之一;腫瘤組織中微小RNA (microRN...[繼續(xù)閱讀]

    細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。就真核生物而言,細(xì)胞除了有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核外,還有線粒體、溶酶體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器。除了某些細(xì)胞外的多肽激素和某些蛋白質(zhì)與酶以外,對于細(xì)胞內(nèi)或多細(xì)胞生物組織中的各種生物...[繼續(xù)閱讀]

    抽提通常是指在分離純化之前將經(jīng)過預(yù)處理或破碎的細(xì)胞置于溶劑中,使被分離的生物大分子充分釋放到溶劑中,并盡可能保持原來的天然狀態(tài)不丟失生物活性的過程。這一過程是將目的產(chǎn)物與細(xì)胞中其他化合物和生物大分子分離,即...[繼續(xù)閱讀]

    一般粗提液的體積都比較大,應(yīng)經(jīng)過進一步濃縮和分離純化處理。常用的濃縮和純化方法和技術(shù)有沉淀法(包括鹽析、有機溶劑沉淀、選擇性沉淀等)、透析、超過濾、冷凍干燥、離心、吸附層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和...[繼續(xù)閱讀]

    生物大分子制成品的正確保存極為重要,一旦保存不當(dāng),造成樣品失活、變性、變質(zhì),將會使前面的全部制備工作化為烏有,前功盡棄,損失慘重。影響生物大分子樣品保存的主要因素有:(1)空氣:空氣的影響主要是潮解、微生物污染和自動...[繼續(xù)閱讀]

    生物大分子制備方案是在分離純化過程中幾種方法聯(lián)合使用的總稱,它是以達到樣品純化目的為前提的。制備方案設(shè)計合理,就能達到事半功倍的效果。本節(jié)主要討論生物大分子制備方案的設(shè)計和評價。一、方案設(shè)計鑒于樣品制備方案...[繼續(xù)閱讀]

    一、離心基本原理當(dāng)含有細(xì)小顆粒的懸浮液靜置不動時,重力場的作用使得懸浮的顆粒逐漸下沉。粒子越重,下沉越快,反之密度比液體小的粒子就會上浮。微粒在重力場下移動的速度不僅與微粒的大小、形態(tài)和密度有關(guān),而且與重力場...[繼續(xù)閱讀]

    離心機可分為工業(yè)用離心機和實驗用離心機。實驗用離心機又分為制備型離心機和分析型離心機。制備型離心機主要用于分離各種生物材料,每次分離的樣品容量比較大;分析型離心機一般都帶有光學(xué)系統(tǒng),主要用于研究純的生物大分...[繼續(xù)閱讀]

    差速離心是指低速與高速離心交替進行,使各種沉降系數(shù)不同的顆粒先后沉淀下來,達到分離的目的。沉降系數(shù)差別在一個或幾個數(shù)量級的顆粒,可以用此法分離。樣品離心時,在同一離心條件下,沉降速度不同,通過不斷增加相對離心力...[繼續(xù)閱讀]

    密度梯度離心法又稱為區(qū)帶離心法,它是將樣品加在惰性梯度介質(zhì)中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。此法的優(yōu)點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適...[繼續(xù)閱讀]