大腸桿菌必需基因的CRISPR-Cas9敲除策略及高效質(zhì)粒置換方法

摘要： 由于必需基因的功能必須性使其難以從基因組上被刪除，而此前報道的方法存在效率低、非無痕敲除等缺點。基于此，該文建立了一種基于CRISPR/Cas9的基因組必需基因高效無痕敲除方法。以大腸桿菌metK基因(編碼S-腺苷甲硫氨酸合酶)為例，首先將metK基因克隆至質(zhì)粒pTarget-metK,并采用定點突變方式將metK基因進行同義突變移除對應(yīng)的PAM序列，構(gòu)建獲得質(zhì)粒pHL3。進一...